预冻阶段:低温固化,锁住样品活性
升华干燥阶段:真空环境下的冰直接汽化
解析干燥阶段:去除残留吸附水
小型教学 / 基础科研级:
常规科研级:
高精度研发级:
定制化特种级:
使用前准备(核心前提)
设备检查:① 确认电源、地线连接牢固,水冷机型确保冷却水流量≥5L/min、水温≤25℃;② 检查真空泵油位(在上下刻度线之间),油色清澈无杂质(发黑需立即更换);③ 清洁冻干舱、冷凝舱,确保无残留样品或杂物,密封胶圈无破损、变形,涂抹少量硅脂增强密封性;④ 开机预热 30 分钟,测试制冷系统(冷凝温度达到设定值)、真空系统(能稳定抽至≤10Pa)是否正常。
样品处理:① 液体样品:分装到冻干瓶或专用托盘,厚度≤3mm(实验室样品建议≤2mm,加速干燥),避免装液量超过容器容积的 1/3;② 固体样品:切成 0.3~0.5cm 小块,均匀平铺,避免堆叠;③ 热敏性样品(如酶、细胞):提前在 - 80℃冰箱预冻 1~2 小时,缩短设备预冻时间,减少活性流失。
标准操作步骤(以常规科研级原位预冻机型为例)
步骤 1:样品装载。将样品容器均匀摆放在搁板上,间距≥2cm,避免遮挡温度传感器和气流通道;关闭冻干舱门,锁紧卡扣,确保密封严密(实验室机型密封要求更高,轻微泄漏会导致真空度不达标)。
步骤 2:参数设置。① 预冻温度:比样品共晶点低 8~10℃(如多肽样品共晶点 - 35℃,设为 - 45℃);② 预冻时间:样品完全冻结后延长 1~2 小时,常规样品 4~6 小时,热敏性样品 6~8 小时;③ 真空度:常规样品设为 5~10Pa,高精度需求(如生物制剂)设为 1~5Pa;④ 升华温度:从预冻温度逐步升温,速率≤3℃/h,最终升至 - 5℃~0℃,时间 8~12 小时;⑤ 解析温度:升华完成后升温至 25℃~35℃,时间 6~10 小时。
步骤 3:启动运行。严格遵循 “制冷→真空→加热” 顺序:先启动制冷系统,待冷凝温度稳定后启动预冻;预冻完成后启动真空系统,真空度稳定在设定值以下后,启动加热系统进入升华阶段;升华结束后切换至解析加热模式。
步骤 4:过程监控。① 每 1 小时记录一次温度、真空度数据(实验室科研需留存完整数据);② 观察冷凝舱霜层:均匀结霜为正常,局部无霜可能是样品分布不均;③ 若真空度突然上升,立即停机检查密封或样品状态,避免样品融化。
步骤 5:停机与样品保存。① 解析完成后,关闭加热系统,维持真空 30 分钟;② 缓慢充入干燥氮气(纯度≥99.99%),直至舱内压力恢复常压(避免压力骤升损坏样品);③ 快速取出样品,用密封盖或真空包装密封,短期存于 4℃冰箱,长期存于 - 20℃~-80℃冰箱,防止吸潮。
步骤 6:设备维护。① 日常清洁:用无水乙醇擦拭冻干舱、搁板、密封胶圈,冷凝舱除霜后用清水冲洗擦干;② 定期维护:真空泵每 300~500 小时换油,每年校准温度传感器和真空度仪表,密封胶圈每 6 个月检查一次。
正常真空度范围
真空度异常的常见原因及解决方法
真空度达不到正常范围:① 密封胶圈破损或有污渍→清洁胶圈,老化则更换;② 真空泵油污染或不足→更换专用真空泵油(实验室需用高纯度真空油);③ 管路泄漏→检查管路接口,重新密封(可用肥皂水涂抹接口,冒泡处为泄漏点);④ 样品挥发物过多→提前预冻样品,减少挥发性成分。
真空度波动过大:① 冻干舱门未锁紧→重新关紧卡扣;② 温度传感器故障→校准或更换传感器;③ 真空泵性能下降→维护真空泵(清理进气过滤器、更换叶片)。
真空度选择技巧
普通样品(如果蔬、化学试剂):5~10Pa,兼顾干燥效率和成本;
生物活性样品(如细胞、酶):1~5Pa,避免氧气残留影响活性;
易氧化样品(如抗氧化剂、金属纳米材料):≤1Pa,配合氮气保护,减少氧化损耗。